T4 RNA连接酶2

描述：T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特 异性将 5’末端预腺苷化的DNA或 RNA连接到RNA的 3’ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。 T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型的双点突变体。 K227 和 R55 的双突变降低了赖氨酰腺苷化，并提高了酶的 连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平相当。 连接反应的背景被降为最低是因为：不再使用 ATP，而改用 预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用 于二代测序 small RNA 的文库构建。 组分 名称 4000U 20kU T4 RNA Ligase2, truncated K227Q (200 U/μl) 20μl 100μl 10×T4 RNA Ligase Buffer 500μl 500μl 50% PEG 8000 500μl 500μl 储存：-20℃可保存 3 年。 活性定义：1 单位指 37℃条件下，30 分钟内完成 1nmol 的 单链 ssDNA 所需要的酶量。 使用注意事项 （1）1×T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5， 10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要 ATP。 （2）最佳反应温度 37℃，65℃ 10min 可使该酶失活。 （3）该酶的连接接头需要 5’-预腺苷化。不能连接磷酸化底 物。 （4）该酶不能连接双链 DNA 或 RNA。 （5）加入终浓度 5~10% PEG 8000 可提高连接效率。

截短型T4 RNA连接酶2为T4 RNA连接酶2的突变体，能特异性将5’末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3’ OH末端。与野生型与T4 RNA连接酶2相比，截短型T4 RNA连接酶2催化的的连接反应无需ATP，但需预腺苷化接头，这样连接反应的背景最大程度的降低，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用于二代测序small RNA 的文库构建，优化了接头的连接过程。
组分
组分名称 数量 T4 RNA Ligase2, truncated K227Q (200 U/μl) 20 μl/100 μl 10×T4 RNA Ligase Buffer 500 μl 50% PEG 8000 500 μl
应用
将预腺苷化的DNA或RNA序列连接到任何RNA的3’末端 将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA文库构建 将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异性cDNA文库构建
活性定义
200单位指在标准反应体系，25℃反应条件下，1h能将80%的31-merRNA连接到预腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
1. 1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要ATP。 2. 最佳反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。 3. 该酶的连接接头需要5’-预腺苷化，不能连接磷酸化底物。 4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。 5. 加入终浓度5~10% PEG 8000可提高连接效率。

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