selleck产品在文献中的引用:  
    
   
Proc Natl Acad Sci   U S A, 2013, 110(33):13588-93
  
  
   
Tuberc Respir Dis, 2013, 75(1):9-17
  
  
   
PLoS ONE, 2013, 8(8): e72053
  
  
   
J Hematol Oncol, 2013, 6:18
  
  
   
Molecular Oncology, 2013,   10.1016/j.molonc.2013.12.014
  

客户使用selleck产品的实验数据:

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生物活性
产品描述
Rapamycin (Sirolimus)是一种选择性的mTOR抑制剂，IC50为~0.1 nM。
靶点
mTOR
 
 
 
 
 
IC50
~0.1 nM [1]
 
 
 
 
 
体外研究
Rapamycin作用于HEK293细胞，抑制内源性mTOR活性，IC50为~0.1 nM,而iRap和AP21967 作用时，IC50分别为~5 nM 和~10 nM。[1] Rapamycin处理酿酒酵母，诱导细胞周期停在G1/S期，且抑制翻译。[2] Rapamycin显著抑制T98G和U87-MG细胞活力，这种作用具有剂量依赖性，IC50分别为2 nM和 1 μM, 而对U373-MG细胞没有作用活性，IC50>25 μM。Rapamycin(100 nM) 作用于对Rapamycin敏感的U87-MG和T98G细胞，通过抑制mTOR功能，而诱导细胞周期停在G1期，也诱导自噬而不是凋亡。[6]
体内研究
在体内，Rapamycin 处理，特定阻断mTOR下游靶点，如p70S6K磷酸化和激活，和PHAS-1/4E-BP1导致的eIF4E抑制释放, 完全阻断跖肌重量和纤维尺寸的肥厚增高。[3] 短期Rapamycin处理,即使按最低剂量0.16 mg/kg处理, 强抑制p70S6K活性, 与提高的肿瘤细胞死亡和Eker肾脏肿瘤坏死相关。[4] Rapamycin作用于CT-26移植瘤模型，通过降低VEGF产量，及阻断VEGF诱导的内皮细胞信号，而抑制转移性肿瘤生长和血管新生。[5] Rapamycin每天按4 mg/kg剂量处理C6移植瘤，显著降低肿瘤生长，和肿瘤血管通透性。[7]
临床实验
Rapamycin作用于结节性硬化症(TSC)患者擦除血管纤维瘤目前处于二期研究阶段。
特征
 
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: [1]
mTOR激酶免疫印迹法测定
HEK293细胞按每孔2-2.5×105个细胞接种在12孔板上，DMEM培养基上血清饥饿处理24小时。使用浓度不断增加的Rapamycin(0.05-50 nM)在 37oC下处理细胞15分钟。加入血清，终浓度为20%，在37oC下处理30分钟。细胞溶解，使用SDS-PAGE分离细胞裂解液。再溶解的蛋白转移到聚偏(二)氟乙烯膜上，使用抗p70 S6激酶Thr-389的磷酸化的一抗进行免疫印迹。使用ImageQuant 和KaleidaGraph分析数据。
细胞试验: [6]
细胞系
U87-MG, T98G, 和 U373-MG
浓度
溶于DMSO,终浓度为~25 μM
处理时间
72 小时
方法
使用不同浓度Rapamycin处理细胞72小时。为了测量细胞活力，通过胰蛋白酶化收集细胞，使用台酚蓝染色，计数每孔的存活细胞数。为了测定细胞周期, 使细胞胰蛋白酶化,与70%乙醇混合, 使用碘化丙啶染色。使用FACScan流式细胞仪和CellQuest软件分析样本DNA含量。为了测定凋亡, 细胞染色，通过末端脱氧核苷酸转移酶调节的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）技术，使用一个ApopTag凋亡检测试剂盒对细胞进行染色。为了测定酸性囊泡细胞器(AVO)的进展,使用吖啶橙(1 μg/mL)对细胞进行染色15分钟，使用荧光显微镜检测。为了量化AVOs的进展,使用吖啶橙(1 μg/mL) 对细胞进行染色15分钟, 然后使用胰蛋白酶-EDTA使其从实验板上移除，最后使用FACScan流式细胞仪和CellQuest 软件分析。为了分析自噬过程，细胞和0.05 mM丹(磺)酰戊二胺(MDC)在37oC下温育10分钟，然后在荧光显微镜下观察。
动物实验: [7]
动物模型
皮下接种表达VEGF-A的C6大鼠胶质瘤细胞的无胸腺Nu/Nu小鼠
配制
溶于溶剂溶液(0.2% 羧甲基纤维素和0.25% Tween-80，溶于无菌水)
剂量
~4 mg/kg/day
给药处理
腹腔注射
溶解度
0.5% CMC/0.25% Tween 80, 30 mg/mL
参考文献
[1] Edwards SR, et al. J Biol Chem, 2007, 282(18), 13395-13401.
[2] Barbet NC, et al. Mol Biol Cell, 1996, 7(1), 25-42.
[3] Takeuchi H, et al. Cancer Res, 2005, 65(8), 3336-3346.
[4] Bodine SC, et al. Nat Cell Biol, 2001, 3(11), 1014-1019.
[5] Kenerson HL, et al. Cancer Res, 2002, 62(20), 5645-5650.
[6] Guba M, et al. Nat Med, 2002, 8(2), 128-135.
[7] Phung TL, et al. Cancer Cell, 2006, 10(2), 159-170.
[8] MG Mohi, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2004, 101(9), 3130–3135.