蛋白质羰基测定试剂盒 微量法
产品名称： 蛋白质羰基测定试剂盒 微量法
英文名称： Micro Protein Carbonyl Assay Kit
产品编号： BC1275
产品价格： 0
产品产地： 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标： Solarbio
更新时间： 2024-06-28T09:15:13
使用范围： null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
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产品内容:
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂 0.1g×5 支，4℃保存。（使用前根据样品数，每支加 1mL 水溶解，每支为 10 个样品用 量）
试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。
试剂六：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
产品说明：
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化 损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。 羰基与 2,4-二**苯肼反应生成红色 2,4-二**苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。
操作步骤：
一、样品处理： 组织样品：称取约 0.1g 组织样品，加入 1mL 提取液，充分匀浆后于 4℃，5000rpm 离心 10min， 取上清，加入 0.1mL 试剂一，室温放置 10min，4℃，12000rpm 离心 10min，取上清，然后取 20μL 测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。
二、测定步骤和操作表：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 370nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
| 空白管 | 测定管 |
样品（μL） | 60 | 60 |
试剂二（μL） |
| 120 |
试剂三（μL） | 120 |
|
混匀，37℃避光反应 1h | ||
试剂四（μL） | 150 | 150 |
静置 5min，4℃，12000rpm 离心 15min，弃上清，留沉淀 | ||
试剂五（μL） | 300 | 300 |
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀。重复 3 次 | ||
试剂六（μL） | 300 | 300 |
漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm 离心 15min，取 上清 1mL 于石英比色皿，试剂六调零，测定 OD370 | ||
三、计算公式：
1、按蛋白浓度计算：
蛋白质羰基含量（μmol/mgprot）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V 样品) =（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4.4÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
蛋白质羰基含量（μmol/g 鲜重）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V 样品÷V 提取) =（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4÷W ε：蛋白质羰基消光系数， 22μmol•mL-1•cm-1；d：比色皿光径， 1cm；V：加入试剂六体积， 0.3mL； V 样：加入样本体积，0.06mL； V 提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样品质量，g。
注意事项： 1. 试剂一使用前根据要测定的样品数现配，配置好后 4℃保存，若变为黑色，则不能使用。 2. 试剂二见光易分解，反应需严格避光。