cDNA文库构建试剂盒

产品及特点

利用真核生物的各种组织或细胞中的Poly(A)+ RNA合成cDNA，然后进行基因克隆，这在分子生物学实验中被广泛应用。这一技术的使用，使基因的结构解析及目的蛋白的表达等变得更为方便。一般合成cDNA以及构建cDNA Library的方法为： ① 合成与目的Poly(A)+ RNA相互补的双链cDNA；② 将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组； ③ 将重组体导入细菌或真核细胞内进行扩增， 构建cDNA Library。构建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析，或者进一步进行体外转录或体外翻译等。本试剂盒是以动植物由来的Poly(A)+ RNA为模板合成双链cDNA后，将双链cDNA与Plasmid Vector进行重组，构建质粒cDNA Library的试剂盒。试剂盒中使用的载体pAP3neo含有SV40启动子，可以在哺乳动物细胞内进行表达 具有下列特点：

1. 操作简便：使用Ready-to-Use型试剂。

2. 高灵敏度：能够高灵敏度地检出凋亡细胞的片断化DNA。

3. 高特异性：抑制完整的染色体DNA的混入，选择性地提取断片化DNA。

4. 快速操作：整体操作约需2.5小时。

5. 定 量 性： 与荧光色素组合可以对片断化DNA进行定量。

6. 安 全 性： 不使用苯酚氯仿等。

使用及效果

详细使用步骤请参见使用手册。

备注

*1 Oligo(dT)18 Anchor Primer中含有Not I Site及Xho I Site，如果不用Not I而用Xho I进行酶切时，也可以制备EcoR I-Xho I双链cDN**段构建cDNA文库（此时不能使用本试剂盒中的pAP3neo载体）。本试剂盒中不含有Xho I酶，需要时请另外购买。详细情况请参考补充说明。

*2 与cDNA Synthesis Kit（M-MLV Version）中所含有的组份不同。

*3 EcoR I、Not I酶切后的载体。EcoR I酶切端具有磷酸基团，Not I酶切端已经被去磷酸化，不具有磷酸基团。

*4 本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒（质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DN**段，该DN**段上含有抗四环素基因）为模板，由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的，Control RNA（约1.4 kb）的3’端具有30个A碱基的Poly(A)+尾。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中后，如果插入的cDNA确实为全长，那这种质粒便可获得四环素抗性。

*5 可用于Insert Check及DNA测序。T3 Promoter Primer（for pAP3neo）是pAP3neo载体的专用序列，与商品化的T3 Primer序列不同，不能用商品化的T3 Primer对pAP3neo载体进行测序。试剂盒中Primer和Adaptor的碱基序列请参考“补充说明”。

*6 需要-80℃运输和保存。